|
" تغيير سازه ژني با استفاده از وکتور جديد با هدف افزايش بيان ژن سم AnCra1 "
زارع ميرک آبادي، عباس
| شماره شناسایی
|
:
|
18886222
|
| شماره مدرک
|
:
|
۶۸۱۸۴
|
| نام عام مواد
|
:
|
[گزارش نهایی -عادی]
|
| شناسه افزوده
|
:
|
زارع ميرک آبادي، عباس
|
|
|
:
|
ربيعي، هادي
|
| عنوان اصلي
|
:
|
تغيير سازه ژني با استفاده از وکتور جديد با هدف افزايش بيان ژن سم AnCra1
|
| نام نخستين پديدآور
|
:
|
زارع ميرک آبادي، عباس
|
| عنوان اصلي به زبان ديگر
|
:
|
Possible change in gene constract using new vector to gain more expression of Ancra-1 toxin
|
| وضعیت انتشار
|
:
|
کرج: موسسه تحقيقات واکسن وسرم سازي رازي، ۱۴۰۳
|
| فروست
|
:
|
شماره ثبت ۶۸۱۸۴ مورخ ۱۴۰۴/۰۷/۲۹۶۸۱۸۴
|
|
|
:
|
شماره طرح : 12-18-18-016-01018-010397
|
|
|
:
|
سامانه سمپات
|
| توصیفگر
|
:
|
قرب Androctonus crassicauda
|
|
|
:
|
، نوروتوکسین
|
|
|
:
|
، ساختار سوم پروتئین،
|
|
|
:
|
بیان ژن،
|
|
|
:
|
کانال سدیمی
|
| خلاصه یا چکیده
|
:
|
چكيده فارسی:
ساختار مورفولوؤیک عقرب ها در طول چهارصد میلیون سال اخیر تغییرات اندکی داشته است. سموم عقرب ها مجموعه ای پیچیده از اجزاء فعال زیستی است که با تاثیر بر کانالهای یونی به عنوان مهمترین ناحیه هدف، عملکرد دارند. عقرب های خطرناک دارای سم α با پپتیدهایی زنجیر بلند و چهار پل دی سولفیدی موثر بر کانالهای سدیم می باشند.
برمبنای اهمیت کلینیکی و پزشکی سم عقرب A. crassicauda در ایران در این مطالعه و در ادامه مطالعه پیشین جهت بهبودی سازه ژنی و نیز بهینه سازی بیان ژن پپتید توکسیک AnCra1، با آنالیز ژن و توالی اسیدآمینه ای توکسینAnCra1 شناسایی شده و بیان شده در سیستم PDB و بانک UniProt و بررسی بیوانفورماتیک و بهینه سازی توالی پپتید جهت بیان در باکتری E.Coli نسبت به انتخاب و طراحی و ساخت کانستراکت ژنی مناسب با ویژگی های بیانی قابل قبول (ایجاد سه جهش نقطه ای اختصاصی مکان و نیز اضافه شدن تگ های ویژه) در سیستم وکتوری pET22b (بجای pET32a) اقدام و با تهیه سویه باکتری پذیرا E.Coli RG2 (بجای E.Coli BL21) با قابلیت DE3 نسبت به فرایند کلونسازی و بیان ژن نوترکیب با شرایط بهبود یافته اقدام گردید.
پس از اطمينان از كلونينگ موفق ژن nAnCra1 در پلاسميد، بيان پروتئين در آن کلون با آزمايش هاي SDS-PAGE و ايمونوبلات، مورد بررسي قرار گرفت. باكتري مجاور شده با IPTG در مقايسه با زمان پيش از افزودن IPTG حاوي پروتئين هایی جدید در محدوده 6.5-14.5 کیلودالتون (≈9 KD) بود كه با وزن مولكولي تئوری بیوانفورماتیکال قابل انتظار براي پروتئين همخواني داشت.
در نتیجه پس از بررسی صحت بیان ژنی و تولید پروتئین نوترکیب سم عقرب بصورت عملکردی و با توجه به آنالیز های بیوانفورماتیک ساختار سوم پروتئینی سم، پپتید سمی با نام nAnCra1 بعنوان یک نوروتوکسینα با قابلیت تاثیر بر کانال سدیمی دریچه دار وابسته به ولتاژ معرفی گردید.
کلید واژه:
عقرب Androctonus crassicauda، نوروتوکسین، ساختار سوم پروتئین، بیان ژن، کانال سدیمی
|
|
|
:
|
The morphologic structure of the scorpion has changed little over four hundred million years. Scorpion venoms are a complex collection of bioactive components that act by targeting ion channels. Dangerous scorpions have toxin A with long chain peptides and four disulfide bridges on sodium channels.Based on the clinical and medical importance of A. crassicauda scorpion venom in Iran, in this study and in continuation of the previous study, to improve the genetic structure and also to optimize the expression of the AnCra1 toxic peptide gene, by analyzing the gene and amino acid sequence of the AnCra1 toxin, it was identified and expressed in the PDB system. is and UniProt bank and bioinformatics review and optimization of peptide sequence for expression in E.Coli compared to the selection and design and construction of suitable gene constructs with acceptable expression characteristics (creating three point mutations of a specific location and also adding special tags) in The pET22b vector system (instead of pET32a) was started by preparing the receptive E.Coli RG2 strain (instead of E.Coli BL21) with DE3 capability for the cloning process and recombinant gene expression under improved conditions.After confirming the successful cloning of the nAnCra1 gene in the plasmid, the expression of the protein in that clone was determined by SDS-PAGE and immunoblotting. In comparison with the time before adding IPTG, the bacterium adjacent to IPTG contained new proteins in the range of 6.5-14.5 kilodaltons (≈9 KD), which was consistent with the expected molecular weight of the bioinformatics theory for the protein.As a result, after checking the correctness of gene expression and recombinant production of scorpion venom functionally and according to the bioinformatic analyzes of the third structure of the toxic instructor, the toxic peptide named nAnCra1 was introduced as a neurotoxin with the ability to affect the voltage-dependent gated sodium channel.
Keyword:
Scorpion Androctonus crassicauda, neurotoxin, tertiary structure, gene expression, sodium channel
|
| |