|
" ساخت کيت هاي تشخيصي الايزا غيرمستقيم و رقابتي مبتني بر پپتيد و آنتي بادي پلي اسپيسيفيک براي تيپ O تب برفکي "
مدني، رسول
| شماره شناسایی
|
:
|
18886251
|
| شماره مدرک
|
:
|
۶۸۲۱۰
|
| نام عام مواد
|
:
|
[گزارش نهایی -ویژه]
|
| شناسه افزوده
|
:
|
مدني، رسول
|
|
|
:
|
هزارروسي، مهسا
|
|
|
:
|
گلچين فر، فريبا
|
|
|
:
|
رنجبر، محمدمهدي
|
|
|
:
|
غني زاده، آرش
|
| عنوان اصلي
|
:
|
ساخت کيت هاي تشخيصي الايزا غيرمستقيم و رقابتي مبتني بر پپتيد و آنتي بادي پلي اسپيسيفيک براي تيپ O تب برفکي
|
| نام نخستين پديدآور
|
:
|
مدني، رسول
|
| عنوان اصلي به زبان ديگر
|
:
|
production of ELISA kit to determine foot-and-mouth disease type O based on specific synthetic peptides and poly specific antibodies
|
| وضعیت انتشار
|
:
|
کرج: موسسه تحقيقات واکسن وسرم سازي رازي، ۱۴۰۴
|
| فروست
|
:
|
شماره ثبت ۶۸۲۱۰ مورخ ۱۴۰۴/۰۸/۰۴۶۸۲۱۰
|
|
|
:
|
شماره طرح : 12-18-18-004-02001-020054
|
|
|
:
|
سامانه سمپات
|
| توصیفگر
|
:
|
ویروس تب برفکی پروتئین VP1؛ ؛ الایزای پپتیدی؛ سروتیپ O
|
| خلاصه یا چکیده
|
:
|
مقدمه: ویروس تب برفکی (FMDV) باعث یک بیماری ویروسی بسیار مسری در حیوانات سمدار میشود که از اهمیت جهانی قابل توجهی و مخصوصا در خاورمیانه و شمال آفریقا برخوردار است. بنابراین، تشخیص زودهنگام و دقیق آنتیبادیهای اختصاصی سروتیپ علیه FMDV برای تلاشهای مؤثر در نظارت، کنترل و ریشهکنی بیماری بسیار مهم است. در این مطالعه ما تلاش کردیم کیت الایزا پپتیدی را در حالت آزمایشگاهی و نیمه صنعتی بسازیم.
روش و مواد کار: دو پپتید ایمونوژنیک خنثی کننده در پروتئین سروتیپ ویروس FMD O VP1 از طریق بررسی گسترده ایمونو انفورماتیکی طراحی و مهندسی و سنتز شیمیایی شدند. کونژوگاسیون این پپتیدها با BSA با دو لینکر EDC/NHS و گلوترآلدئید جهت ایمن سازی و اتصال به پلیت صورت گرفت. چکر بورد جهت تیتراسیون آنتی ژن-آنتی بادی و غلظت مناسب نسبت به یکدیگر و نسبت به کونژوگه انجام شد. سپس مقایسه با یکت تجاری صورت گرفت. تمام این امو در دو سطح آزمایشگاهی و نیمه صنعتی صورت پذیرفت. در نهایت حد آستانه ( (Cutt-off و انواع آنالیزه ای آماری و کنترل کیفی بر روی کیت پپتیدی توسعه یافته انجام شد.
نتایج: نتایج بهدستآمده نشان داد که PEP1 در هر دو روش ELISA و SNT ایمنیزاتر از Pep2 بود. نتایج نشان داد تراکم نوری مساوی و بالای 0.3 (OD≥0.3) به عنوان حدآستانه (واکسینه یا بیمار بودن دام) و نتایج چکر کیت نیمه صنعتی 100 نانوگرم آنتی ژن بهینه در رقت 1/10 سرمی و 200 نانوگرم در رقت 1/100 آزمایشگاهی نشان داد. OD ما بین 0.2 تا 0.3 به عنوان حد مشکوک در نظر گرفته شد. تایج OD ، 0.8 ≤ به عنوان دام داری سطح ایمنی محافظت کننده (Sero-protect، معادل تست خنثی سازی سرمی یا SNT (Serum Neutralization Test ) 1.2 ≤ گزارش شد. همچنین OD، مابین 0.7 تا 0.8 به عنوان "احتمالا ایمن" یا "نقطه مرزی" از نظر ایمنی در نظر گرفته شد. OD ، بالای 0.8 تا 2.1 ( 2.1 ≤X ≤0.8 ) به عنوان دو مثبت (++) ثبت گردید. نتایج OD مابین0.3 تا 0.75(0.75≥ ≥ X0.3( به عنوان ایمنیت پائین در نظر گرفته می شود. نتایج بالاترOD از 1.2 (OD≥1.2) ، در کیت به عنوان +++ ارزیابی شد. این OD ها در تست SN ، همسان یا بالاتر از نتیجه 1.8 قرار می گیرند. نتایج بالاتر از OD ، 8/1 به عنوان خیلی قوی یا هایپر ایمن (چهار مثبت ++++) در نظر گرفته می شود. این سرم ها در تست SN در بالای مقدار 2.1 قرار می گیرند.
بحث: یکی از مزایای اصلی کیت حاضر ساده سازی انجام تست و تفسیر آن بدون محاسبات پیچیده نسبت به کیت تجاری می باشد که این امر توان انجام و تفسیر نتایج را در کاربر به شدت افزایش می دهد. نتایج این پژوهش، آینده ی امیدوارکنندهای را برای استفاده از الایزا پپتیدی علیه FMD و سایر ویروس ها را نشان میدهد. این کیت ها را می توان با هزینه ی پایین تر و در زمان کمتر تهیه کرد و در عین حال پاسخ سیستم ایمنی را نیز افزایش داد.
|
|
|
:
|
Introduction: Foot-and-mouth disease virus (FMDV) causes a highly contagious viral disease in cloven-hoofed animals of significant global importance, especially in the Middle East and North Africa. Therefore, early and accurate detection of serotype-specific antibodies against FMDV is crucial for effective efforts in surveillance, control, and eradication of the disease. In this study, we attempted to develop a peptide ELISA kit in laboratory and semi-industrial settings.
Methods and Materials: Two immunogenic neutralizing peptides in the FMD virus serotype O VP1 protein were designed, engineered, and chemically synthesized through extensive immunoinformatics studies. These peptides were conjugated to BSA with two EDC/NHS linkers and glutaraldehyde for immobilization and plate attachment. Checkerboard titration of antigen-antibody and appropriate concentrations relative to each other and to the conjugate was performed. Then, comparison was made with a commercial product. All of this work was done at both laboratory and semi-industrial levels. Finally, the cut-off and various statistical analyses and quality control were performed on the developed peptide kit.
Results: The results obtained showed that PEP1 was more immunogenic than Pep2 in both ELISA and SNT methods. The results showed that the optical density equal to and above 0.3 (OD≥0.3) was considered as the threshold (vaccination or disease of the animal) and the results of the semi-industrial checker kit showed 100 ng of the optimal antigen at a 1/10 serum dilution and 200 ng at a 1/100 laboratory dilution. OD between 0.2 and 0.3 was considered as the suspicious limit. The OD of ≤0.8 was reported as the animal having a protective immunity level (Sero-protect, equivalent to a serum neutralization test or SNT (Serum Neutralization Test) ≤1.2. Also, OD between 0.7 and 0.8 was considered as "probably safe" or "borderline point" It was considered safe. OD above 0.8 to 2.1 (2.1 ≤X ≤0.8) was recorded as double positive (++). OD results between 0.3 and 0.75 (0.75 ≥ X0.3) were considered as low safety. Results above OD of 1.2 (OD≥1.2) were evaluated as +++ in the kit. These ODs were equal to or higher than the result of 1.8 in the SN test. Results above OD of 1.8 were considered as very strong or hyper safe (four positives ++++). These sera were scored above the value of 2.1 in the SN test.
Discussion: One of the main advantages of the present kit is the simplification of the test performance and its interpretation without complex calculations compared to the commercial kit, which greatly increases the user's ability to perform and interpret the results. The results of this study show a promising future for the use of peptide ELISA against FMD and other viruses. These kits can be prepared at a lower cost and in a shorter time, while also enhancing the immune response.
|
| |